細胞計數儀實操干貨：樣本制備、校準步驟與常見故障排除，新手也能上手

日期：2025-10-21瀏覽：136次

　　細胞計數是生物醫學研究和臨床診斷中的重要環節，而細胞計數儀的出現極大地簡化了這一過程。然而，對于新手來說，如何正確操作細胞計數儀、制備合適的樣本以及解決常見問題，仍然是一個挑戰。本文將詳細介紹它的實操技巧，包括樣本制備、校準步驟以及常見故障排除，幫助新手快速上手并掌握這門技術。

　　一、樣本制備

　　（一）細胞收集

　　樣本制備是細胞計數的第一步，而細胞收集則是關鍵環節。對于貼壁細胞，通常需要使用胰蛋白酶進行消化，使其從培養皿表面脫落。在消化過程中，要密切觀察細胞的形態變化，避免過度消化導致細胞損傷。當細胞開始脫落時，輕輕敲擊培養皿，使細胞脫落，然后加入適量的培養基終止消化。對于懸浮細胞，可以直接收集培養液中的細胞，但要注意避免雜質的混入。

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　　收集到的細胞需要制備成均勻的細胞懸浮液，以便進行準確計數。將收集到的細胞轉移到離心管中，以適當的速度離心（通常為 1000 - 1500rpm，3 - 5 分鐘），去除上清液后，用適量的生理鹽水或培養基輕輕重懸細胞。在重懸過程中，要避免產生氣泡，以免影響細胞計數的準確性。如果細胞濃度過高，可以適當稀釋；如果濃度過低，則需要重新收集細胞。

　　（三）細胞染色

　　為了更準確地計數活細胞和死細胞，通常需要對細胞進行染色。常用的染色方法有臺盼藍染色法和熒光染色法。臺盼藍染色法是基于細胞膜的完整性，活細胞排斥臺盼藍，而死細胞會吸收染料呈現藍色。在染色時，將細胞懸浮液與臺盼藍染液按一定比例混合（通常為 1:1），輕輕混勻后即可進行計數。熒光染色法則需要使用熒光顯微鏡進行觀察，通過熒光染料標記細胞的特定成分，區分活細胞和死細胞。

　　二、校準步驟

　　（一）開機預熱

　　在使用細胞計數儀之前，需要先進行開機預熱。預熱時間一般為 15 - 30 分鐘，具體時間可以根據儀器的說明書進行調整。預熱的目的是讓儀器的光學系統和電子元件達到穩定狀態，從而提高計數的準確性。

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　　校準液是用于校準細胞儀的標準溶液，通常由儀器制造商提供。校準液中含有已知濃度的標準微粒，這些微粒的大小和形狀與細胞相似，可以模擬細胞的光學特性。在進行校準之前，要確保校準液保存良好，無沉淀、渾濁或變質現象。

　　（三）校準操作

　　將校準液按照說明書的要求加入計數池中，然后啟動儀器的校準程序。儀器會自動檢測校準液中的微粒濃度，并與預設的標準值進行比較。如果檢測值與標準值一致，說明儀器處于良好的工作狀態；如果檢測值與標準值存在偏差，儀器會提示需要進行校準調整。根據儀器的提示，進行相應的校準操作，直到檢測值與標準值一致為止。

　　三、常見故障排除

　　（一）計數不準確

　　計數不準確是細胞計數儀常見的問題之一，可能由多種原因引起。首先，要檢查樣本制備是否符合要求，細胞懸浮液是否均勻、是否存在氣泡或雜質。如果樣本制備不當，需要重新制備樣本。其次，要檢查儀器的校準狀態，確保儀器已經正確校準。如果儀器未校準或校準液過期，需要重新進行校準。此外，要檢查計數池是否清潔，是否有殘留的細胞或雜質。如果計數池不清潔，會影響計數的準確性，需要使用專用的清潔液進行清洗。

　　（二）儀器無法啟動

　　如果細胞儀無法啟動，首先要檢查電源連接是否正常，確保儀器已經正確連接到電源插座上。如果電源連接正常，但儀器仍然無法啟動，可能是儀器內部的保險絲熔斷或電源模塊故障。在這種情況下，需要聯系儀器制造商的技術支持人員進行維修。

　　（三）數據傳輸問題

　　在使用細胞計數儀時，數據傳輸是常見的問題之一。如果儀器無法將數據傳輸到電腦或其他設備上，首先要檢查數據傳輸線是否連接正確，確保傳輸線沒有損壞或松動。如果傳輸線連接正常，但數據仍然無法傳輸，可能是儀器的軟件設置問題。檢查儀器的軟件設置，確保數據傳輸格式和參數與接收設備一致。如果問題仍然存在，可以嘗試重新安裝儀器的驅動程序或更新軟件版本。

　　四、總結

　　細胞計數儀是一種高效、準確的細胞計數工具，廣泛應用于生物醫學研究和臨床診斷。通過正確的樣本制備、校準步驟和常見故障排除，新手也可以快速上手并掌握這門技術。在樣本制備過程中，要注意細胞收集、懸浮和染色的細節，確保樣本的質量；在校準過程中，要嚴格按照說明書的要求進行操作，確保儀器的準確性；在使用過程中，要及時發現并解決常見故障，保障儀器的正常運行。希望本文的實操干貨能夠幫助新手更好地使用細胞儀，提高工作效率和實驗結果的可靠性。